STAGE DANS LE SECTEUR DES PATHOLOGIES MITOCHONDRIALES

Ce stage, effectué en juillet et août 1998, a été réalisé sous la direction du Docteur Bénédicte MOUSSON, dirigeant le secteur des Pathologies Mitochondriales du Service de Biochimie Pédiatrique du Docteur Monique MATHIEU à l'hôpital Debrousse (Hospices Civils de Lyon, France).

Thèmes de travail

Etude génétique familiale. Suivi de la transmission de la mutation mitochondriale A3243G au sein d'une famille comportant une personne atteinte de MELAS (Mitochondrial Myopathy, Encephalopathy, Lactic Acidosis and Stroke-like episodes)

Mise au point de la technique de mesure par oxygraphie de l'activité des complexes de la chaîne respiratoire sur mitochondries isolées.

Participation à la mise au point des protocoles d'isolement des mitochondries à partir de tissus (muscle, foie) par centrifugations différentielles.

Techniques utilisées

• Extraction d'ADN mitochondrial à partir d'échantillons sanguins
• Amplification de fragments d'ADN mitochondrial par PCR
• Digestion des produits de PCR par des enzymes de restriction
• Migration électrophorétique en gel d'agarose
• Amplification par PCR avec introduction de nucléotides marqués au ³²P au cours du dernier cycle, migration en gel d'acrylamide et autoradiographie
• Mesure de la radioactivité par scintillation liquide ou sur Phospho-imageur pour évaluer le taux d'hétéroplasmie
• Isolement de mitochondries
• Mesure de l'activité respiratoire mitochondriale par oxygraphie, en présence de drogues ou substrats spécifiques de chaque complexe de la chaîne respiratoire